Monkeypox Virus reālā laika PCR komplekts

1. ParaugsKolekcija:Paraugi jāsavāc sterilās mēģenēs saskaņā ar

ar standarta tehniskajām specifikācijām.

2. Reaģenta sagatavošana (reaģenta sagatavošanas zona)

Izņemiet komplekta sastāvdaļas, līdzsvarojiet tās istabas temperatūrā, lai varētu izmantot gaidīšanas režīmā.

3. Paraugu apstrāde (paraugu apstrādes zona)

3.1 Nukleīnskābju ekstrakcija

Nukleīnskābju ekstrakcijai ieteicams ņemt 200 μL šķidruma paraugus, pozitīvo kontroli un negatīvo kontroli saskaņā ar attiecīgajām vīrusu DNS ekstrakcijas komplektu prasībām un procedūrām.

3.2. Liofilizēta pulvera izšķīdināšana un šablona pievienošana

Sagatavojiet Monkeypox Virus liofilizēto premiksu atbilstoši paraugu skaitam.Vienam paraugam nepieciešama viena PCR caurule, kurā ir liofilizēts premiksa pulveris.Negatīvā kontrole un pozitīvā kontrole jāuzskata par diviem paraugiem.

(1) Pievienojiet 15 μL šķīdināšanas šķīduma katrā PCR mēģenē, kurā ir liofilizēts premikss, pēc tam pievienojiet 5 μL ekstrahētos paraugus/negatīvo kontroli/pozitīvo kontroli katrā PCR mēģenē.

(2) Cieši nosedziet PCR mēģenes, ar roku švīkājiet PCR mēģenes, līdz liofilizētais pulveris ir pilnībā izšķīdis un sajaukts, savāciet šķidrumu līdz PCR stobriņu apakšai, veicot tūlītēju zema ātruma centrifugēšanu.

(3) Ja noteikšanai izmanto parasto reāllaika PCR instrumentu, tad tieši pārnes PCR mēģenes uz amplifikācijas zonu;ja noteikšanai izmanto BTK-8, tad jāveic šādas darbības: pārnes 10 μL šķidruma no PCR caurules uz BTK-8 reakcijas mikroshēmas iedobi.Viena PCR caurule atbilst vienai mikroshēmas iedobei.Pipetēšanas laikā pārliecinieties, ka pipete ir 90 grādu vertikāli.Aerosola barjeras pipetes uzgaļi jānovieto iedobes centrā ar mērenu spēku un jāpārtrauc pipetes stumšana, kad tā sasniedz pirmo pārnesumu (lai izvairītos no burbuļu veidošanās).Pēc tam, kad iedobes ir piepildītas, izņemiet reakcijas mikroshēmas membrānu, lai pārklātu visas iedobes, un mikroshēma tiek pārnesta uz amplifikācijas noteikšanas zonu.

4. PCR pastiprināšana (noteikšanas apgabals)

4.1. Ievietojiet PCR mēģenes/reakcijas mikroshēmu reakcijas tvertnē un iestatiet katras reakcijas iedobes nosaukumus attiecīgajā secībā.

4.2. Noteikšanas fluorescences iestatījumi: (1) pērtiķu baku vīruss (FAM);(2) Iekšējā kontrole (CY5).

4.3 Palaidiet tālāk norādīto riteņbraukšanas protokolu

ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio protokols:

 BTK-8 protokols:

5. Rezultātu analīze (lūdzu, skatiet instrumenta lietotāja rokasgrāmatu)

Pēc reakcijas rezultāti tiks automātiski saglabāti.Noklikšķiniet uz “Analīze”, lai analizētu, un instruments automātiski interpretēs katra parauga Ct vērtības rezultātu kolonnā.Negatīvie un pozitīvie kontroles rezultāti atbilst šādam "6. Kvalitātes kontrole".

6. Kvalitātes kontrole

6.1. Negatīvā kontrole: nav Ct vai Ct>40 FAM kanālā, Ct≤40 CY5 kanālā ar normālu pastiprināšanas līkni.

6.2. Pozitīvā kontrole: Ct≤35 FAM kanālā ar normālu pastiprināšanas līkni, Ct≤40 CY5 kanālā ar normālu pastiprinājuma līkni.

6.3. Rezultāts ir spēkā, ja ir izpildīti visi iepriekš minētie kritēriji.Pretējā gadījumā rezultāts ir nederīgs.

Rezultātu interpretācija

Ir iespējami šādi rezultāti:

PIEZĪME: Ja tiek iegūts nederīgs rezultāts, paraugs ir jāsavāc un vēlreiz jāpārbauda.